Testy ImmunoCAP wykrywające obecność swoistych przeciwciał IgE są złotym standardem w diagnostyce alergii. Wyniki testu dostarczają informacji, które pomagają specjalistom zastosować odpowiedni plan postępowania terapeutycznego.
ImmunoCAP , ImmunoCAP ISAC112i to dwa systemy oznaczania swoistych przeciwciał IgE w surowicy pacjenta których producentem jest firma ThermoFisher.
Przedstawiamy listę alergenów testu ISAC (multiplex, 112 alergenów w panelu) oraz ImmunoCAP singleplex (alergeny pojedyncze).
Testy molekularne obrazują szczegółowy profil uczulenia. Wskazują pierwotną przyczynę uczulenia (alergen swoisty gatunkowo) oraz alergeny krzyżowo reagujące, co pozwala na głębsze zrozumienie przyczyn choroby i ocenę ryzyka wystąpienia ciężkich reakcji.
Obecność swoistych przeciwciał IgE określana jest jako uczulenie i pozostaje ważnym czynnikiem ryzyka, ale nie jest to jednoznaczne ze stwierdzeniem choroby alergicznej. Chorobę alergiczną rozpoznaje lekarz po przeprowadzeniu szczegółowego wywiadu, badaniu pacjenta, analizy objawów występujących po ekspozycji na alergen.
System ImmunoCAP jest metodą ilościową, uznaną przez Europejską Akademię Alergologi i Immunologii za „złoty standard” i jest metodą referencyjną.
Wyniki testu ISAC korelują z wynikami testu ImmunoCAP.
Do napisania tego tekstu skłoniło mnie takie oto „znalezisko „ internetowe. Oto co na jednych ze stron podejmujących tematykę alergii przeczytałam:
Porada : „Wiosna i lato to najtrudniejszy czas dla uczulonych na trawy oraz zboża, dlatego, żeby nie nasilać i tak nieprzyjemnych objawów (katar sienny, łzawienie oczu, duszności) wynikających z samego pylenia, trzeba wyeliminować z diety w tym czasie rośliny, które wchodzą w reakcję krzyżową z trawami i zbożami. „
Następnie autor wyszczególnia pokarmy które należy wyeliminować. Okazało się że „zestaw” pokarmów do eliminacji powtarza się również na kilku kolejnych portalach. Autorzy wymieniają następujące pokarmy: ziemniaki, pomidory, kasztan jadalny, arbuz, kiwi, melon, pomarańcz , pieprz, jabłka , orzechy, pszenicę , żyto, jęczmień.
Tak więc mamy całkiem sporo pokarmów do wyeliminowania. Czy jest to zasadne?
O CO CHODZI W REAKCJACH KRZYŻOWYCH?
Pyłek traw, według terminologii molekularnej diagnostyki alergii, jest źródłem pochodzenia alergenów. Alergen jest cząsteczka białka o określonej budowie i właściwościach. Dokładna analiza białek zawartych w pyłku doprowadziła do wyodrębnienia kilku istotnych alergenów odpowiedzialnych za występowanie reakcji na pyłek traw. Głównymi alergenami pyłku traw jest alergen o nazwie Phl p 1 oraz Phl p 5. Te alergeny nie występują w innych gatunkach roślin. Jeżeli test alergologiczny wykaże obecność przeciwciał IgE dla tych alergenów, świadczy to rzeczywistym uczuleniu na pyłek traw i zbóż.
Kolejne alergeny występujące w pyłku traw – Phl p 12– białko należące do grupy białek reagujących krzyżowo o nazwie profilina. Białka profilin występują we wszystkich pyłkach roślinnych i pokarmach pochodzenia roślinnego.
Jeżeli wynik testu wykaże obecność swoistych przeciwciał IgE dla tych białek , osoba uczulona może odczuwać reakcje po spożyciu w postaci surowej melona, arbuza, owoców cytrusowych, pomidora czy banana.
Kolejnym alergenem należącym do grupy białek reagujących krzyżowo jest Phl p 7. To grupa białek o nazwie polkalcyny. Występują we wszystkich pyłkach roślinnych. Nie są obecne w pokarmach. Obecność sIgE dla tych białek wyjaśnia objawy występujące po ekspozycji na różne pyłki roślinne.
UCZULENIE NA TRAWY A ZIARNA ZBÓŻ
Ziarna zbóż – pszenica, żyto, jęczmień, owies – alergeny zawarte w ziarnach zbóż są zupełnie innymi białkami niż alergeny pyłku traw. Dlatego bez pogłębionej diagnostyki dieta eliminacyjna polegająca na wykluczeniu z diety ziaren zbóż nie ma uzasadnienia.
Test alergologiczne wykonane przy pomocy ekstraktów wskazują jedno źródło uczulenia. Testy molekularne w oparte wyłącznie na alergizujących białkach obrazują szczegółowy profil uczulenia wskazując pierwotną przyczynę uczulenia oraz określenie alergenów krzyżowo reagujących co pozwala na usystematyzowanie tego co dotychczas było mylące.
Ze względu na różnorodność i zasięg występowania alergenów reagujących krzyżowo, pacjentowi trudno jest na podstawie samoobserwacji dociec przyczyny występujących objawów.
Ale obserwacja objawów, stopień ich nasilenia, okoliczności w jakich występują są cenną wskazówką dla lekarza specjalisty który analizuje zgłaszane dolegliwości. Lekarz podejrzewając uczulenia na wiele różnych czynników może wskazać wykonanie szerokiego spektrum alergenów lub też zlecić wykonanie badania dla kilku z nich. Nie w każdym przypadku zasadne jest wykonywanie jak najszerszego testu alergologicznego.
Terminem CCD określa się struktury węglowodanowe, które w połączeniu się z białkami tworzą glikoproteiny.
Reszt CCD zostały rozpoznane 40 lat temu. Struktury te zostały zidentyfikowane w szerokiej gamie źródeł alergenów (pyłek roślin, pokarmy pochodzenia roślinnego, jady). Połączenie białka z oligosacharydem może odbyć się w różnoraki sposób, jednak w przypadku klasycznych reszt CCD, połączenie następuje poprzez N (azot grupy aminowej).
W najnowszym wydaniu Molecular Allergy User’s Guide 2.0, w rozdziale „Cross reactive carbohydrate determinants” prof Ronald Van Ree wskazuje:
„Fakt, że sIgE dla CCD mogą dać pozytywne wyniki w testach in vitro IgE z ekstraktem alergenu, ale pozostają negatywne w SPT in vivo z tym samym ekstraktem, świadczy o słabej aktywności biologicznej sIgE dla determinant węglowodanowych”.
Czy zatem dodatni wynik testu dla ekstraktu alergenów spowodowany obecnością swoistych przeciwciał IgE dla reszt CCD jest wynikiem fałszywie dodatnim?
„Celem dobrego testu serologicznego jest czułe wykrywanie specyficznych IgE. Wynik fałszywie pozytywny byłby kwestią tła z niespecyficznym wiązaniem IgE”. To oczywiście nie jest to samo, co rozumie się przez wynik fałszywie dodatni w przypadku sIgE dla CCD. Jest to prawdziwe specyficzne IgE . W tym przypadku, „fałszywie dodatni” oznacza nieistotny klinicznie.„
W niektórych testach stosowany jest inhibitor CCD. Jak wskazują przeprowadzone badania bloker nie eliminuje CCD całkowicie. Ponadto jak wskazuje prof Van Ree:
„Potencjalną wadą zastosowania blokera reszt CCD jest to, że czułość testu diagnostycznego testu jest zmniejszona przez konkurencyjny format wymagający rozcieńczenia surowicy.”
Panel testu ISAC obejmuje alergeny istotne klinicznie. Zastosowanie alergenów rekombinowanych które nie zawierają krzyżowo reagujących epitopów CCD , nie wymaga zastosowania blokera reszt CCD.
W diagnostyce alergii bardzo ważnym czynnikiem jest jakość materiału źródłowego z którego przygotowuje się alergen. Firma ThermoFisher współpracuje z dostawcami posiadającymi stosowne certyfikaty potwierdzające metodę pozyskiwania materiału źródłowego. Pyłki drzew, traw, chwastów są zbierane w warunkach kontrolowanych. Jakość i czystość materiału jest udokumentowana.
Ponad 20 milionów ludzi w Europie cierpi na alergie pokarmowe, a 1/4 dzieci w wieku szkolnym w Europie żyje z chorobą alergiczną. W tym dniu #WorldFoodDay, EAACI podnosi świadomość znaczenia tworzenia solidnych planów zapobiegania, diagnostyki i opieki. Wypowiedź Prezydenta Europejskiej Akademii Alergologii i Immunologii – profesor Marek Jutel.
Dr Isabel Skypala-Consultant Allergy Dietitian- wykład :The Dietary Management of Food Allergy.
Test alergologiczny wykonuje się w celu potwierdzenia reakcji organizmu na określony alergen. Do wykonania testu potrzebny jest odpowiedni preparat zawierający alergeny które należy zbadać. Powszechnie używanym preparatem był tzw. ekstrakt alergenów.
Ekstrakty są złożonymi mieszaninami alergenów, enzymów, innych białek i związków pochodzących z naturalnych źródeł alergenów.
Jest preparatem przygotowywanym naturalnego materiału źródłowego (np. pyłek roślin, roztocze, czy pokarmy). Na skład i właściwości biologiczne ekstraktu ma wpływ jakość i czystość materiału źródłowego oraz warunkiprzechowywania, przetwarzania i ekstrakcji.
Zalety preparatu:
Przygotowanie bez szczegółowych etapów oczyszczania.
Odzwierciedla zawartość alergenów w naturalnych źródłach pochodzenia.
Znany produkt.
Wady preparatu:
Mogą zawierać niealergizujące składniki o różnych właściwościach.
Ryzyko różnic w zawartości i proporcji alergenów.
Mogą występować różnice pomiędzy poszczególnymi partiami produktu.
Nie dostarczają informacji o molekułach.
Ekstrakty różnią się składem istotnych alergenów.
Molekularna diagnostyka alergii
alergeny psa
Alergen rekombinowany (molekuła) wyizolowana cząsteczka alergizującego białka o zdefiniowanych właściwościach. Wytwarzany z zachowaniem spójności pod względem jakości.
MEDI-LITE Pracownia testów alergologicznych Anna Różyło – Przedstawiamy wynik testu ISAC wykonany u pacjenta w roku 2010 (wiek pacjenta 4 lata) i 2020 (wiek pacjenta 14 lat).
Wyniki testu ISAC wykonane w 2020 roku pokazują znaczy wzrost poziomu swoistych przeciwciał IgE dla głównego alergenu pyłku brzozy Bet v 1 oraz pozostałych alergenów należących do rodziny białek PR-10.
W ramach programu MeDALL (Mechanisms for the Development of Allergies), w grupie 764 dzieci , w 3 grupach wiekowych (4 lata, 8 lat, 16 lat), u których występowały objawy ze strony górnych dróg oddechowych po ekspozycji na pyłki brzozy, wykonano test ISAC, oparty na technologii microarray Wyniki badań zostały poddane analizie pod kątem reaktywności sIgE na alergeny należące do rodziny białek PR-10.
Analiza wyników testu ISAC wykazała hierachię uczulenia na poszczególne białka z rodziny PR-10: Bet v 1 > Mal d 1 > Cor a 1.04 > Ara h 8 > Pru p 1 > Aln g 1 > Api g 1 > Act d 8 > Gly m 4.
Ryzyko wystąpienia i utrzymywania się dolegliwości ze strony górnych dróg oddechowych do 16 roku życia wzrastało wraz ze wzrostem poziomu sIgE dla alergenu Bet v 1, jak również z ilością sIgE dla reaktywnych białek PR-10 we wczesnym dzieciństwie.
Tak więc analiza profilu uczulenia na białka PR-10 we wczesnym dzieciństwie może być użytecznym narzędziem w przewidywaniu przebiegu i nasilenia objawów w późniejszym wieku.
MEDI-LITE Pracownia testów alergologicznych Anna Różyło: Przedstawiamy wynik testu ISAC wykonany u pacjenta w roku 2010 (wiek pacjenta 4 lata) i 2020 (wiek pacjenta 14 lat).
W roku 2010 wynik badania serologicznego wykazał obecność przeciwciał dla tylko dla alergenu Phl p 5 w bardzo niskim poziomie 1,0 ISU-E.
Wynik testu wykonany w roku 2020 wykazał obecność przeciwciał dla 5 alergenów traw. Poziom sIgE dla alergenu Phl p 5 wzrósł do 100 ISU-E.
Wyniki badań uzyskane metodą microarray pokazują schemat rozwoju uczulenia na pyłki traw u dzieci. Początkowy, niski poziom przeciwciał dla jednego lub kilku składników alergenu pyłku traw może poprzedzać objawy alergii występujące w późniejszym okresie. Uczulenie rozprzestrzenia się na pozostałe składniki alergenu pochodzące z tego samego źródła uczulenia.
Rozwój uczulenia na pyłek traw – rozprzestrzenianie molekularne.
Badania przeprowadzone w ramach programu MeDALL (Mechanisms for the Development of Allergies), w którym zbadano 763 osób, w 3 grupach wiekowych (4 lata, 8 lat, 16 lat) poddane analizie pod kątem reaktywności IgE na 8 alergenów, ujawniły że alergen Phl p 4 obok alergenu Phl p 1, jest wczesnym wskaźnikiem alergii na pyłki traw.
2020 American Academy of Allergy, Asthma & Immunology ttps://doi.org/10.1016/j.jaci.2020.01.006
Pomiar reaktywności IgE na pojedyncze alergeny pyłków traw w dzieciństwie może pomóc klinicystom we wczesnym wykrywaniu uczulenia i prognozowaniu późniejszej alergii na pyłki traw.
ImmunoCAP ISAC test przeznaczony dla molekularnej diagnostyki alergii. Zawiera alergeny znajdujące się w bazie alergenów Światowej Organizacji Zdrowia/Międzynarodowej Unii Towarzystw Immunologicznych (WHO/IUIS).
CECHY TESTUISAC
Obejmuje alergeny istotne klinicznie.
Zastosowanie alergenów rekombinowanych, wolnych od krzyżowo reagujących CCD, nie wymaga zastosowania blokera.
Przedstawia przekrojowy, indywidualny obraz uczulenia.
Wyjaśnia przyczynę reakcji krzyżowych ze wskazaniem potencjalnych źródeł narażenia.
Umożliwia ocenę ryzyka wystąpienia ciężkich reakcji alergicznych.
Ułatwia właściwą kwalifikację pacjenta do swoistej immunoterapii.
Wydruk wyniku testu ISAC 112 i podzielony jest na kilka części. Pierwsza strona wydruku jest zestawieniem dodatnich wyników testu. Na kolejnych stronach przedstawione są wszystkie alergeny, wobec których test został wykonany.
ISU-E wskazuje poziom swoistych przeciwciał IgE dla określonego alergenu z zakresie 0,3 -100 ISU-E co odpowiada zakresowi stężeń 0,3-100 KUA/L w systemie ImmunoCAP.
ANALIZA WYNIKU TESTU ISAC
Czy u pacjenta objawy spowodowane są reakcją na alergen swoisty gatunkowo (prawdziwa przyczyna uczulenia)?
Czy objawy spowodowane są reakcją krzyżową?
Czy istnieje ryzyko wystąpienia reakcji ogólnoustrojowej?
Czy bezwzględna dieta eliminacyjna jest konieczna?
281 badań z zastosowaniem ImmunoCAP ISAC publikowanych w recenzowanych czasopismach.
Publikacje w czasopismach pochodzących z 20 różnych krajów (obejmujące różne wzorce uczuleń)
200 badań opublikowanych w Europie; 89 od 2017 roku.
VALIDA projekt: Przed wyborem konkretnego badania diagnostycznego in vitro należy upewnić się, że istnieją wystarczające dowody naukowe na poparcie klinicznego zastosowania testu mając na uwadze cel badania, jakim jest otrzymanie wiarygodnych danych, które skutkują w klinicznym postępowaniu z pacjentem. Stosowanie testów, które nie są poparte solidną bazą dowodów naukowych może skutkować opóźnioną i mniej dokładną diagnozą, co z kolei może mieć negatywny wpływ na jakość życia pacjenta.
„Prawdopodobnie każdy z nas przynajmniej raz w życiu oddawał krew. Procedura wydaje się mało skomplikowana. Pielęgniarka pobiera krew do probówki, podpisuje ją lub nakleja kod kreskowy i umieszcza na statywie. Wszystko jest bardzo proste, ale co dalej? Dokąd trafia badana krew i co się z nią dzieje? Jakie są dalsze etapy procedury diagnostycznej? Niezależnie od tego, jaka czeka ją podróż, cała „tajemnica” odbędzie się za zamkniętymi drzwiami laboratorium. „
Molekularna diagnostyka alergii/ ISAC test 